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    广东11选5绝对杀一码:毕业论文--马铃薯StUBC30基因的克隆及表达载体的构建.doc 17页

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    PAGE PAGE 2 本科毕业论文 题 目 马铃薯StUBC30基因的克隆 及表达载体的构建 学 院 生命科学技术学院 专 业 生物技术(植物方向) 毕业届别 2 姓 名 指导教师 职 称 甘肃农业大学教务处制 二〇一八年五月 目 录 TOC \o "1-3" \h \z \u 摘要 2 关键词 2 Abstract 2 Key words 2 前言 3 1材料与方法 4 1.1 材料与试剂 4 1.1.1 材料 4 1.1.2 仪器与试剂 4 1.2 方法 5 1.2.1 StUBC30基因引物的查询与设计 5 1.2.2马铃薯试管苗的培养 5 1.2.3马铃薯RNA的提取与cDNA链的合成 5 1.2.4马铃薯StUBC30基因的PCR扩增 5 1.2.5 PCR产物的回收 6 1.2.6 T18载体连接 6 1.2.7连接产物的转化 6 1.2.8阳性克隆的测序与序列分析 7 1.2.9表达载体的构建 7 1.2.10连接产物的检测 8 2 结果与分析 8 2.1 RNA纯度的测定结果 8 2.2 RNA的凝胶电泳结果 9 2.3目的基因凝胶电泳结果 9 2.4克隆载体构建及其送测结果 10 2.5双酶切结果 11 2.6目的片段与表达载体连接结果 11 3 讨论 12 参考文献 13 致谢 14 附录1 15 附录2 15 附录3 15 附录4 16 马铃薯StUBC30基因的克隆及表达载体的构建 摘要:泛素结合酶E2是蛋白质翻译后修饰的重要方法,有研究证明E2与各种生理过程和生物过程有关,如:干旱胁迫、盐胁迫、植物的生长发育等。在这个实验中,用马铃薯(Solanum tuberosum L.)大西洋(Atlantic)品种为研究对象,分别提取了马铃薯不同器官中的总RNA,使用紫外分光光度计测定RNA的纯度和浓度,用琼脂糖凝胶电泳技术分析出所提取RNA样品的完整性,然后合成cDNA的第一链;使用PCR扩增技术扩增出StUBC30基因,构建T-18克隆载体并导入到大肠杆菌DH5α,St UBC30基因的阳性克隆载体通过蓝白色斑筛选获得,之后进行双酶切,将目的基因与CPB表达载体连接并导入大肠杆菌DH5α,提取质粒再次进行双酶切,并在公司测定阳性克隆载体和阳性表达载体序列。双酶切结果显示:小片段和大片段的大小与目的片段大小及空载体片段大小一致;测序结果表明:目的基因的CDS区与测序结果完全一致未发生碱基突变,表明PMD-StUBC30克隆载体及CPB- StUBC30过表达载体构建成功,为后续研究干旱胁迫下马铃薯StUBC30基因的应答机制提供实验材料。 关键词:马铃薯;泛素化;干旱;StUBC30 Cloning of Potato StUBC30 Gene and Construction of its expression Vecto FuXue (Major in Biotechnology in the College of Life Science and Technology of Gansu Agricultural University,Gansu Lanzhou,730070) Abstract: Ubiquitin-conjugation enzyme is one of the important methods of protein posttranslational modification, Studies have shown that E2 is associated with a variety of physiological and biological processes. Such as drought stress, salt stress, plant growth and development, etc. In this experiment, the potato variety Atlantic was used as the research object. The total

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